基因组DNA提取之前的样本储存

起始材料的质量影响着分离的DNA的质量和产量。纯化来自于新鲜采集的组织和细胞的基因组DNA时，可以达到最高的DNA产量和质量。

如果样品在采集之后无法即时处理，则可将其储存在可保留DNA完整度的条件下。总的来说，如果样品，尤其是动物样品，在未经处理的情况下在2–8°C或–20°C条件下储存，会造成基因组DNA的产量下降。

此外，应避免对冻存样品反复冻融，因为这会造成基因组DNA大小变小，同时还会造成病原DNA（例如，病毒DNA）的产量下降。我们将在下文讨论不同起始材料建议的储存方法。

血液

将要储存的血液样品中应添加抗凝剂。例如，采用肝素或EDTA处理的血液样本可在2–8°C下储存数天，或在–20°C或–80°C下储存数周。此外，采用ACD溶液B（0.48%柠檬酸，1.32%柠檬酸钠，1.47%葡萄糖；每6 ml血液使用1 ml）处理的血液样本，在2–8°C下至少可储存5天，在–20°C下至少可储存1个月。

如需长期储存，可准备血液细胞核，并在–20°C下储存。

其它临床样本

大多数生物液（例如，血浆、血清和尿液）和粪便样本可在2–8°C下储存数小时。如需长期储存，建议在–20°C或–80°C下冰冻。拭子可在室温下干燥储存。

福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)是另一种样本储存方法，尤其适用于临床组织样品。根据组织类型，生物分子在收集后发生分解、诱导或改性的速度存在差异。因此，组织切除和固定的操作步骤应尽可能简短、快捷。组织的固定涉及将样本放入福尔马林溶液的步骤，而后者的组分则存在各种差异（常用的10%福尔马林溶液含有3.7%的甲醛和1–1.5%的甲醇）。由此引发的化学反应导致生物分子之间发生交联，包括核酸之间、蛋白质之间以及核算和蛋白质之间的交联。为获得最优的固定结果，应采用中性缓冲的福尔马林溶液，而非未缓冲或酸性的福尔马林溶液。中性缓冲液可减缓福尔马林的降解，目前可以确信的是后者降解的产物会对核酸质量造成一定程度的破坏。为确保最优的固定效果，福尔马林和组织的体积比应至少达到10:1。在处理较小的组织样本（如针穿刺吸取组织活检样本）时，这一目标很容易实现。但在处理体积较大的组织样本时，用于组织固定的福尔马林溶液则可能会出现不足。在此情况下，应将组织切片之后再进行福尔马林固定。为避免过度固定(overfixation)，组织固定时间应不超过24小时。经过福尔马林固定后，组织样本将要包埋在石蜡中，这一过程包括几步:

第一步脱水：即采用酒精（通常为乙醇）取代水。

接下来两步为：

透明：即采用二甲苯和二甲苯替代物取代酒精；

浸蜡：即用石蜡取代二甲苯。

最后一步是包埋，即整个组织用石蜡包裹起来。

在浸蜡之前，确保组织样本已完全脱水非常重要，因为残留的水分会造成样本降解。为避免酒精和二甲苯因之前使用而可能携带水分，建议始终采用新鲜的酒精和二甲苯。为确保自FFPE样本恢复可用的DNA时能获得最佳恢复效果，应采用较低的解冻温度解冻石蜡。此外，应避免采用含有蜂蜡等添加剂的石蜡，因为这一类添加剂可能会干扰生物分子的恢复。

动物组织

新鲜采集的组织可以立即冰冻，并在–20°C、–80°C下，或者液氮中储存。裂解的组织样本可在室温下，在适宜的裂解液中储存数月。

动物和人体组织也可固定储存。我们建议您采用酒精和福尔马林等固定剂；但如果组织在福尔马林中长期储存，会导致DNA出现化学修饰。

如果需要从组织中分离DNA，建议不要采用可能会引起交联反应的固定剂，如锇酸。此外，还可从石蜡包埋的组织中分离DNA。

动物、酵母和细菌细胞培养

离心处理采集的细胞培养液，吸弃上清液，然后在–20°C或–80°C下储存细胞。此外，还可准备动物细胞核并在–20°C下储存。

植物组织

在不影响DNA质量或产量的前提下，大多数植物属的新鲜叶子和针叶最多可在4°C下储存24小时。通常意义上讲，如果样本计划的储存时间超出24小时，则应在–80°C下储存。即便如此，仍有部分样本（如树芽）可在4°C下储存数天。组织在4°C下储存时，为避免脱水，应避免在密闭的容器内储存。较大的样本（如，树枝）则可储存在含有一块湿润的纸巾的塑料袋中。

如果冻存样本的方法不符合实际情况，则可采用大量方法干燥植物组织，例如硅胶、食品脱水剂或冻干机(3)。为防止DNA降解，应至少在24小时内使材料彻底干燥。如需长期储存，干燥后的样本应在黑暗、室温、干燥或气密条件下储存。

根据样本的处理方式，植物标本和法医学样本中的DNA可能会存在不同程度的降解。破碎过的植物材料可在室温下，在适宜的裂解液中储存数月。

真菌材料

菌丝应直接从培养皿或液体培养液中采集。如从液体培养液中采集，在进行DNA分离和储存前，应采用离心法沉淀细胞，并吸弃上清液。采集的样本可以直接冷冻或冻干，并在–80°C下储存。